實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,qPCR)是一項(xiàng)以PCR反應(yīng)為基礎(chǔ)的DNA定量技術(shù),通過對目標(biāo)基因在擴(kuò)增過程中產(chǎn)生的拷貝數(shù)進(jìn)行實(shí)時(shí)的定量,從而達(dá)到對目的基因的定性和定量分析。常用的對PCR產(chǎn)物進(jìn)行熒光定量檢測的方法有兩種:一種是利用熒光染料與雙鏈DNA結(jié)合,通過熒光強(qiáng)度進(jìn)行定量;另一種是利用攜帶了熒光報(bào)告基團(tuán)的特異DNA探針對目標(biāo)基因進(jìn)行定量。
技術(shù)優(yōu)勢
1.實(shí)驗(yàn)過程透明,結(jié)果真實(shí)可靠。
2.豐富的qPCR實(shí)驗(yàn)操作經(jīng)驗(yàn),確保您在極短的時(shí)間里得到真實(shí)可靠的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
3.強(qiáng)大的技術(shù)支持團(tuán)隊(duì),為您的科研道路保駕護(hù)航。
服務(wù)流程
1.樣品RNA的抽提。
2.RNA質(zhì)量檢測。
3.樣品cDNA合成。
4.梯度稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品及待測樣品的管家基因(β-actin)實(shí)時(shí)定量PCR。
5.制備用于繪制梯度稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線的DNA模板。
6.待測樣品的待測基因?qū)崟r(shí)定量PCR。
7.實(shí)時(shí)定量PCR使用引物列表。
8.電泳。
9.數(shù)據(jù)分析及報(bào)告交付。
樣品要求
1.細(xì)胞樣品:收集細(xì)胞后放入液氮中速凍保存或速東24h后轉(zhuǎn)入-80℃冰箱保存;收集細(xì)胞后,視細(xì)胞量,直接加入1~1.5mL Trizol溶解裂解細(xì)胞,再轉(zhuǎn)入-80℃冰箱保存。
2.組織樣品:動(dòng)物組織一般取材后立即放入液氮中速凍保存,液氮凍存24h后可轉(zhuǎn)入-80℃冰箱保存;組織樣品同樣可以采用Trizol溶解裂解后放入-80℃冰箱保存。特殊組織(植物等)建議采用新鮮組織即刻提取RNA,逆轉(zhuǎn)合成cDNA后-20℃保存?zhèn)溆谩K袠悠返奶幚砗捅4孢^程中,切總反復(fù)凍融。
注:樣品運(yùn)輸條件:樣品運(yùn)輸條件根據(jù)實(shí)驗(yàn)樣品的處理?xiàng)l件,可以選擇液氮或者干冰運(yùn)輸。
發(fā)貨內(nèi)容
1.熒光定量所有原始結(jié)果(包括RNA濃度及純度檢測數(shù)據(jù),qPCR原始數(shù)據(jù),擴(kuò)增曲線及熔解曲線圖)。
2.詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)報(bào)告(包括實(shí)驗(yàn)原理,實(shí)驗(yàn)方法,儀器,試劑,引物或探針序列,數(shù)據(jù)分析結(jié)果等)。